解讀反相液相色譜的左膀右臂
在液相色譜方法開發(fā)時(shí)選擇合適的有機(jī)溶劑需要考慮幾大關(guān)鍵因素(見最后的表格)。其中,黏度是重要因素之一,因?yàn)楦唣ざ热軇?huì)產(chǎn)生高背壓,因而可能會(huì)對(duì)儀器系統(tǒng)帶來限制。
其它重要的溶劑特征還包括UV截止波長(zhǎng)和極性指數(shù):UV截止波長(zhǎng)較高會(huì)導(dǎo)致UV/Vis檢測(cè)的靈敏度不佳,而溶劑的極性指數(shù)較低則往往會(huì)導(dǎo)致化合物洗脫較快,因而通常用于色譜柱的清洗。
優(yōu)選溶劑:
乙腈、甲醇、丙酮
乙腈 毫無疑問是優(yōu)選的有機(jī)溶劑,因?yàn)槠湓谂c水的混合體系中產(chǎn)生的系統(tǒng)背壓極低,而且UV截止波長(zhǎng)也很低,因此UV/Vis檢測(cè)的靈敏度更高。
甲醇 是另一種常用的有機(jī)溶劑,它的洗脫強(qiáng)度與乙腈相當(dāng),UV吸收相對(duì)其他溶劑也較低,而且價(jià)格比乙腈便宜得多。甲醇的主要缺點(diǎn)是粘度較大帶來的高背壓,尤其是在使用小粒徑的HPLC色譜柱時(shí)更為明顯。
雖然丙酮 的UV吸收較高,但如果分析物在較高的UV波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè),或者使用其它類型檢測(cè)器,如質(zhì)譜或ELSD,則丙酮也可以進(jìn)行有效的使用。
次選溶劑:
乙醇、異丙醇/正丙醇、四氫呋喃
一般不建議使用乙醇,因?yàn)槠湓谂c水的混合體系中產(chǎn)生很高的背壓。但是有時(shí)乙醇對(duì)于針對(duì)成品的制備方法來說是優(yōu)先選擇,因?yàn)樗梢员苊馊軇埩簟?/span>
異丙醇和正丙醇 的洗脫強(qiáng)度較高,也是色譜柱進(jìn)行低流速清洗最常用的溶劑,但是它們同樣會(huì)產(chǎn)生較高的背壓。另外,它們是很好的助溶劑,在分析完整蛋白時(shí)經(jīng)常被使用。
四氫呋喃 的洗脫強(qiáng)度與正丙醇相當(dāng),但由于較昂貴所以不太常用。但是,它可以作為脂肪或高色素樣品的清洗或再生溶劑。
[來源:飛諾美]